重组人肠激酶轻链的原核表达、纯化及活性分析

• 作者: 吉雪雪 李娇 李彦军 李霞 杨斌盛 钮利喜
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 人肠激酶轻链 融合表达 亲和层析 活性分析
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能研究
• 页码范围: 1597-1602
• 语种: 中文

摘要

[目的]在原核表达系统中实现人肠激酶轻链(Human enterokinase light chain, hEKL)的表达和纯化.[方法]通过PCR扩增得到编码hEKL的基因片段,利用基因重组技术构建原核表达质粒pMAL-s-hEKL,在Escherichia coli中进行诱导表达,菌体经超声破碎后利用Amylose亲和柱对目标蛋白进行纯化,并利用Tricine SDS-PAGE检测酶的切割活性.[结果]目的基因能够以可溶形式表达,每升发酵液可纯化得到40 mg纯度在97％以上的MBP-hEKL蛋白,活性检测表明该酶可以对含有肠激酶识别序列的蛋白进行特异性切割,酶活力达到6.0× 105 U/μmol.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨斌盛	山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室	79	362	10.0	15.0
2	钮利喜	山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室	16	60	4.0	6.0
3	李娇	山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室	7	6	2.0	2.0
4	吉雪雪	山西大学化学生物学与分子工程教育部重点实验室	1	2	1.0	1.0
5	李霞		1	2	1.0	1.0
6	李彦军		1	2	1.0	1.0