人乳头状瘤病毒癌蛋白E6和E7双标记质粒的构建及应用

• 作者: 何丽 史景莉 唐旭东 张二盈 李刚
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头状瘤病毒 增强型绿色荧光蛋白 质粒构建 稳定转染 肺癌
• 年，卷（期）: 2012,（31）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 6045-6050
• 分类号: R373.9|R734
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)-16 E6、E7癌蛋白及其突变型的双筛选标记质粒并筛选出稳定表达HPV-16癌蛋白的肺癌A549细胞株.方法:以携带新霉素抗性基因neo的pEGFP质粒(pEGFP-N1)为空载体,在EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点间插入HPV-16 E6、E7及其突变型基因.新构建的质粒鉴定后转染A549细胞并用G418筛选,多次挑取单克隆后用流式细胞仪分选带荧光的细胞.结果:PCR、双酶切鉴定结果及DNA序列测定结果均证实质粒构建正确；PCR扩增结果显示细胞中存在目的基因；流式细胞术结果显示细胞阳性率高；Western blotting结果显示细胞能表达HPV-16 E6、HPV-16 E7蛋白.结论:成功构建pEGFP-E6、E7质粒并筛选出稳定表达E6和E7癌蛋白的A549细胞株,为进一步研究HPV对肺癌的影响奠定了基础；同时发现G418筛选结合流式细胞仪分选可提高稳定转染细胞的阳性率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐旭东	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	49	273	9.0	14.0
2	何丽	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	3	2	1.0	1.0
3	李刚	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	3	1	1.0	1.0
4	张二盈	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	1	1	1.0	1.0
5	史景莉	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	2	1	1.0	1.0