呋喃唑酮代谢物单克隆抗体制备及酶联免疫吸附分析方法

• 作者: 任海涛 孙远明 徐振林 杨金易 沈玉栋 王弘 肖治理 雷红涛
• 来源期刊: 分析化学
• 学科: 化学
• 关键词: 呋喃唑酮 单克隆抗体 酶联免疫法 异源包被
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 745-751
• 分类号: O65
• 字数: 4752字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1096.2012.10409

摘要

本研究针对呋喃唑酮代谢物(AOZ),设计合成了系列半抗原,进一步通过偶联牛血清白蛋白(BSA)免疫Balb/c小鼠、细胞融合、筛选和亚克隆等过程成功获得了源于新颖半抗原H3的具有高亲和力(亲和力常数6.68× 1010L/mol)和高特异性(与其它功能类似物交叉反应小于0.1％)抗AOZ单克隆抗体.同时,基于设计合成的系列同/异源半抗原/包被抗原,考察了不同结构包被原对ELISA方法灵敏度的影响.另外,采用最佳的特征结构异源包被原H5 -OVA,建立了以对硝基苯甲醛(p-NP)为衍生剂的AOZ间接竞争ELISA(icELISA)和直接竞争ELISA(deELISA)检测方法.结果表明:icELISA模式的AOZ检测IC50为0.503 μg/L,定量检测线性范围(IC20～IG80)为0.06～14.0 μg/L,检出限(IC10)达0.017 μg/L; dcELISA模式的AOZ检测IC50为1.19 μg/L,定量检测线性范围为0.14～23.6 μg/L,检出限为0.056 μg/L.两种方法对AOZ的检测灵敏度和定量线性范围均达到相关检测限量要求,可满足不同需求的实际样品检测.