肝癌相关抗原SMP30重组基因的构建、表达及分子伴侣共表达系统的探索

• 作者: 凌敏 周素芳 范升龙 贺菽嘉 黄朋
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: SMP30 基因工程 表达与纯化 分子伴侣质粒 共表达
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 170-175
• 分类号: R735.7
• 字数: 5331字
• 语种: 中文

摘要

旨在通过应用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌相关抗原SMP30,研究共表达分子伴侣提高基因工程蛋白表达的可溶性及效率.PCR扩增SMP30 cDNA序列,用基因工程技术构建重组表达质粒,转化E.coli BL21( DE3) pLysS宿主菌.表达蛋白经Ni-NTA亲和柱纯化获得HIS-SMP30融合蛋白；分别将4种表达不同分子伴侣的质粒(pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pTf16)转入E.coli BL21( DE3)中；然后再将重组质粒转入含有分子伴侣质粒的细胞中,进行分子伴侣与重组质粒的共表达,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达量与可溶性分析.经优化表达条件后,目的蛋白以包涵体形式表达,目的蛋白占总蛋白的60％以上；纯化后纯度高达95％以上;诱导共表达后,目的蛋白在上清含量极少,不到总表达目的蛋白的10％.成功构建出高效表达的SMP30重组质粒；加入到诱导表达体系中的4种分子伴侣质粒不能有效的促进可溶性蛋白的表达,pTf16共表达系统能增加目的蛋白表达量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贺菽嘉	广西医科大学生物化学与分子生物学教研室	19	92	5.0	8.0
2	黄朋	广西医科大学生物化学与分子生物学教研室	2	5	1.0	2.0
3	范升龙	广西医科大学生物化学与分子生物学教研室	1	5	1.0	1.0
4	凌敏	广西医科大学生物化学与分子生物学教研室	26	80	5.0	8.0
5	周素芳	广西医科大学生物化学与分子生物学教研室	45	166	7.0	11.0