利用巢式PCR扩增目的基因构建hsa-miR-200c真核表达载体及鉴定

• 作者: 张洪义 曹文虎 杨翠萍 王净 窦骏 陈峻崧 陈登宇
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 巢式PCR miR-200c 卵巢癌 SKOV3细胞
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 59-63
• 页数: 5页
• 分类号: R737.31
• 语种: 中文

摘要

目的 用巢式PCR从人类基因组获取miR-200c及侧翼序列,构建hsa-miR-200c重组体,转染卵巢癌细胞系SKOV3,检测其对E-钙粘蛋白表达的影响,为miR-200c对肿瘤细胞基因表达调控奠定基础.方法 据microRNA数据库设计人miR-200c及侧翼引物,提取人细胞基因组进行PCR和巢式PCR获得miR-200c及侧翼共307个碱基序列,连接到pIRES2-EGFP载体中,测序鉴定后再将的miR-200c基因经慢病毒载体系统转染SKOV3细胞,检测miR-200c过表达对卵巢癌细胞E-钙粘蛋白表达的影响.结果 成功扩增出miR-200c及侧翼共307个碱基序列,构建的重组体pIRES2-EGFP-miR-200c测序正确,转染SKOV3细胞后miR-200c过表达引起E-钙粘蛋白表达增多.结论 巢式PCR技术能有效地从基因组中扩取miR-200c及侧翼片段用以构建miR-200c表达载体,miR-200c过表达可引起卵巢癌SKOV3细胞E-钙粘蛋白表达增多,可能导致细胞间黏附性增高.