Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的研究

• 作者: 包秀丽 宋慧 汤欣
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Wnt3A蛋白质 晶体 上皮细胞 上皮间质转化 连环素
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 312-317
• 分类号: R77
• 字数: 4229字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2012.04.006

摘要

目的 研究Wnt3a促进人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的作用,并探讨相关分子机制.方法 实验研究.构建Wnt3a cDNA表达载体,采用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染入人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞中,对照组转入pcDNA3-HA表达载体,蛋白印迹法测定验证过表达效果；蛋白印迹法及免疫荧光染色检测晶状体上皮细胞中β-catenin的表达和定位变化,以及细胞上皮表型标记物E-cadherin和间质表型标记物纤维连接蛋白的表达；体外划痕实验及Transwell小室迁移实验检测Wnt3a过表达对SRA01/04细胞的迁移运动能力的影响.组间计量资料的比较,采用Student's t检验分析.结果 通过构建人Wnt3a cDNA表达载体获得Wnt3a过表达的Wnt3 a/SRA01/04细胞及对照pcDNA3-HA/SRA01/04细胞.Wnt3a过表达促使SRA01/04细胞内的β-catenin细胞定位由胞质转入胞核；使晶状体上皮细胞发生上皮间充质转化(上皮表型E-cadherin表达降低,间质表型纤维连接蛋白表达升高).体外划痕试验中划痕24 h后测得Wnt3 a/SRA01/04细胞的迁移距离是(0.36 ±0.02)mm,明显高于对照组(t=21.98,P＜0.01)；Transwell小室迁移试验中48 h后穿过聚碳酸酯膜的Wnt3 a/SRA01/04细胞数为(92.25±10.34)个,明显多于对照组(t=10.40,P ＜0.01),证明Wnt3 a/SRA01/04细胞的运动迁移能力大大增强.结论 在人晶状体上皮细胞SRA01/04中,Wnt3a过表达使Wnt/β-catenin信号通路活化,诱导细胞发生上皮间充质转化,增强运动迁移能力.