昆虫抗冻蛋白转基因植物表达载体的构建及转基因棉花T1代的检测

• 作者: 张大伟 徐建辉 李春平 王岩 王达 陈亮亮 马纪
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 棉花 花粉管通道法 微量进样器 PCR检测
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 页码范围: 1779-1786
• 分类号: S562|S503.53
• 字数: 4361字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2012.10.003

摘要

[目的]为了提高转基因质粒的表达效果,基于pCAMBIA2300植物表达载体,改造并构建含有小胸鳖甲抗冻蛋白基因Mpafp149、双CaMV35S启动子、Ω增强子和NOS终止子的高效植物表达载体pCN2300 -Mpafp149.[方法]将抗冻蛋白基因采用不同的注射方法对新疆北疆棉区主栽棉花品种进行了花粉管通道法遗传转化.对获得的转基因棉花T1代植株进行PCR及RT-PCR检测.[结果]对Mpafp149、卡那霉素抗性基因NPTⅡ及CaMV35S进行PCR检测,3个结果的阳性一致率达到了80％.此外,通过磨短进样器针头的长度可大幅提高成铃率,直接注射新陆早42号的成铃率达到了37.59％.[结论]小胸鳖甲抗冻基因Mpafp149已转入T1棉花.通过使用改造的进样器注射可大幅提高成铃率.