人心肌肌球蛋白轻链基因启动子驱动的GFP和Luc报告基因在人心肌细胞系中的表达

• 作者: 张颖 李娜 杜兰萍 汪劲松 王世强 罗毅 葛桂玲 许秀芳 赵莉敏 辛毅 黄益民
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肌球蛋白轻链 绿色荧光蛋白 萤光素酶 心肌细胞
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 实验技术
• 页码范围: 1722-1728
• 分类号: R54
• 字数: 5865字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2012.09.035

摘要

目的:构建人肌球蛋白2v基因启动子(pMLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和萤光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体并观察其在人心肌细胞系(HCM)和人肺癌细胞株A549中的整合表达特征.方法:应用去毒化的人类I型免疫缺陷病毒和pMLC2v-GFP或pMLC2v-Luc报告基因构建慢病毒示踪载体,转染HCM和A549细胞,激光共聚焦显微镜及生物发光检测仪观察2种报告基因在不同细胞生长进程中的表达特征.非特异性启动子驱动的GFP(GFPC)和红色荧光蛋白(RFPC)报告基因作为对照.结果:2种细胞转染GFPC和RFPC后第3 d,都表达GFP和RFP;而HCM只在转染pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc 21 d后表达GFP和Luc,A549细胞不表达.结论:pMLC2v主要在培养21 d后新增殖的人心肌细胞中驱动GFP和Luc报告基因表达,这为监测干细胞向心肌细胞的分化进程提供了可靠的病理及活体示踪工具.