结球甘蓝花粉类钙调素蛋白基因BoCML49的克隆及表达分析

• 作者: 孙梓健 宋明 汤青林 王小佳 王志敏 许俊强
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 结球甘蓝 花粉 类钙调素蛋白49 表达分析
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 2162-2169
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2012.02162

摘要

以结球甘蓝E1为材料,提取花粉萌发前和萌发后的混合花粉总蛋白,总蛋白双向电泳后通过MALDI-TOF-MS鉴定分析差异点,根据差异点分析结果,利用同源克隆得到甘蓝BoCML49基因707 bp的cDNA片段.通过对BoCML49基因的qPCR分析表明其表达量在花粉萌发前约为萌发后的2.73倍,表明BoCML49基因在花粉萌发后表达下调.通过5’-Race和3’-Race分别得到550 bp和721 bp大小cDNA片段,最终得到结球甘蓝BoCML49全长cDNA序列,开放阅读框位于125～1 078 bp处,加尾信号(AATAAA)位于第1 222 bp处.通过cDNA推导得到的氨基酸序列分析表明,BoCML49编码317个氨基酸残基,预测分子量为33.51 kD,pI为6.93,经Smart-embl预测其含2个重要的EF-hand结构,分别位于序列第150～178和第216～244位氨基酸残基处,预测结果显示其含有7个α-螺旋和10个β-折叠结构.系统发育树表明结球甘蓝BoCML49与拟南芥AtCML49和AtCML50的亲缘关系较近.BoCML49基因的原核表达得到37.55 kD的融合蛋白.