简化法与传统方法进行淋巴细胞胞内细胞因子染色效果的比较

• 作者: 刘必宽 刘良忠 常世川 朱川 李刚 熊德明 胡建娥 谭建军 陈睿
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 流式细胞术 细胞内染色 Th1细胞 Th2细胞 Th17细胞
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 633-637
• 分类号: R392-33|Q2-33
• 语种: 中文

摘要

目的:分别采用简化法与传统方法进行淋巴细胞胞内细胞因子染色,通过流式细胞术检测比较两种方法的染色效果.方法:取健康志愿者外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),分别经佛波酯(Phorbol myristate acetate,PMA)、离子霉素( Ionomycint,Ion)和莫能霉素(Monensin)刺激4h,分别以传统法(细胞刺激后进行表面染色,再固定,破膜,行细胞内染色)和简化法(细胞刺激后直接固定、破膜,在不同时间段进行膜上膜内同时染色)进行细胞内染色.样本经抗体标记后,采用流式细胞术检测淋巴细胞的百分率.结果:简化法染色检测Th1细胞的百分比与传统染色方法相比,差异无统计学意义(P＞0.05)；而简化法染色检测Th17细胞的百分比明显高于传统方法(P＜0.05).与传统法比较,应用简化法,细胞于破膜后固定0、48、96 h染色,检测Th2细胞的百分比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:简化法简化了操作流程,有利于流式细胞术的质控,可替代传统染色方法进行淋巴细胞胞内细胞因子染色.