丝裂霉素C对翼状胬肉成纤维细胞膜通透性及超微结构的影响

• 作者: 何艳花 张静辉 李彬斌 杨筱曦 蔡小芳 陈剑
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丝裂霉素C 翼状胬肉 细胞毒性 超微结构
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 490-494
• 分类号: R77
• 字数: 4748字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2012.06.003

摘要

背景 丝裂霉素C(MMC)对人翼状胬肉成纤维细胞的生长和增生有明显的抑制作用,但关于其对细胞膜影响的研究很少. 目的 探讨MMC对翼状胬肉成纤维细胞膜理化特性及超微结构改变的干预.方法 收集翼状胬肉手术切除标本15例,用组织块培养法培养人成纤维细胞,以波形蛋白免疫组织化学染色法对培养细胞进行鉴定.取传3代后对数生长期细胞以5×103个/孔的密度接种于96孔板,将不同质量浓度0、50、100、200、300、400 mg/L MMC加入培养孔中处理翼状胬肉成纤维细胞12h,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测培养细胞的活力,应用Annexin V-FICT/碘化丙啶(PI)法检测细胞凋亡的情况；利用原子力显微镜(AFM)观察不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的改变；检测细胞上清液中丙二醛( MDA)的浓度以评价细胞的脂质过氧化程度；检测细胞外液中漏出的乳酸脱氢酶(LDH)含量以评估细胞膜的通透性变化；用Fluo-3/AM标记和流式细胞术检测培养细胞内游离钙离子的变化. 结果 组织块法原代培养贴壁1～2周可见大量长梭形细胞爬出,波形蛋白检测呈阳性反应.用MMC处理培养细胞12h后,人成纤维细胞的活力减弱,MMC对细胞增生的抑制作用呈剂量依赖性.0、50、100、200、300 mg/L MMC处理组细胞凋亡百分比分别为4.2％、4.2％、5.4％、19.3％和25.8％.AFM下可见不同质量浓度MMC作用后人成纤维细胞膜超微结构的异常,不同质量浓度MMC处理组细胞外液中LDH活性及细胞上清液中MDA浓度明显高于对照组,且均随着MMC质量浓度的增加,LDH活性及细胞上清液中MDA浓度逐渐增加,组间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).Fluo-3/AM标记和流式细胞术检测表明,培养细胞内游离钙离子增多.结论 MMC能引起翼状胬肉成纤维细胞膜的理化性质改变,其作用呈剂量依赖性,细胞膜是其药效和毒性的作用靶点之一.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈剑	暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室	126	747	14.0	21.0
2	蔡小芳	暨南大学化学系	8	61	5.0	7.0
3	杨筱曦	暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室	10	55	5.0	7.0
4	何艳花	暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室	4	10	2.0	3.0
5	张静辉	暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室	22	87	5.0	8.0
6	李彬斌	暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室	3	23	2.0	3.0