葡萄ISSR-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 余亚白 范丽华 谢福鑫 谢鸿根 赖呈纯 郑铭西
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 农学
• 关键词: 葡萄ISSR-PCR 正交设计 单因素试验 反应体系
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 159-164
• 分类号: S663.1
• 字数: 4747字
• 语种: 中文

摘要

采用正交设计L9 (34)对影响葡萄ISSR-PCR反应体系的4个因素(dNTP、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA)在3个浓度水平上进行试验,并通过直观分析初步确定其反应体系;在此基础上,通过单因素试验探讨了dNTP、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA、退火温度及循环次数等因素或条件对葡萄ISSR-PCR扩增结果的影响,确定最佳反应水平.最终建立了葡萄ISSR-PCR扩增的最佳反应体系:在25μL的反应体系中,dNTP浓度0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量0.5 U,引物浓度0.4mmol/L,DNA模板用量40 ng.反应程序:94℃预变性5min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72C延伸1 min 30 s,40次循环;最后72℃延伸10 min,10℃保存.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑铭西	福建省农业科学院农业工程技术研究所	18	64	5.0	7.0
2	谢鸿根	福建省农业科学院农业工程技术研究所	60	435	11.0	18.0
3	范丽华	福建省农业科学院农业工程技术研究所	44	184	8.0	12.0
4	赖呈纯	福建省农业科学院农业工程技术研究所	63	402	11.0	17.0
5	余亚白	福建省农业科学院农业工程技术研究所	57	565	13.0	21.0
6	谢福鑫	福建省农业科学院农业工程技术研究所	1	5	1.0	1.0