桔青霉木聚糖酶基因克隆及其在毕赤酵母中的表达及活性分析

• 作者: 李桂英 李维维 王智 田谷 许修宏 顿宝庆
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 桔青霉 木聚糖酶 毕赤酵母 酶学性质 表达
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 87-93
• 分类号: Q78
• 字数: 6339字
• 语种: 中文

摘要

通过同源序列PCR克隆的方法,获得桔青霉(Penicillium citrinum)CR-2菌株的木聚糖酶编码基因xyl,该基因全长984 bp,编码327个氨基酸,无内舍子序列,具有完整开放阅读框.其编码的氨基酸序列N端具有一段包含19个氨基酸的信号肽序列,并具有糖基水解酶第10家族(GH10)的保守催化域特征,推测该酶属于第10家族成员.将该基因与毕赤酵母表达载体pPIC9相连接构建重组载体pPIC9-XYL,电击转化至毕赤酵母GS115菌株中.挑选阳性重组子经测序、酶活性以及SDS电泳分析表明,xyl基因成功在毕赤酵母中分泌表达,重组酶活性可达214.15 IU/mL.该重组酶最适温度与最适pH分别为50℃和4.5,且具有良好的pH和热稳定性.