PD-L1基因实时荧光定量RT-PCR法的建立及在大鼠肝移植中的应用

• 作者: 刘向伟 巫姜 李涛 林仁勇 温浩 王俊华 赵晋明
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝移植 PD-L1 实时荧光定量RT-PCR SYBR Green I
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5,9
• 页数: 6页
• 分类号: R392.4|R392.32
• 字数: 3985字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立real-time RT-qPCR(实时荧光定量RT-PCR)检测大鼠PD-L1的方法,应用该方法检测大鼠移植肝中PD-L1 mRNA的水平.方法 两袖套法复制大鼠肝移植耐受组(BN→BN)及排斥组( LEW→BN)模型,术后7d处死受体,检测肝功能ALT和AST水平,HE染色病理分析排斥程度,Trizol法提取移植肝总RNA并反转录为cDNA;选β-actin作为内参,复制SYBR Green I real-time RT-qPCR检测法.利用该方法检测移植肝中PD-L1和β-actin的初始模板量,PD-L1/β-actin计算PD-L1 mRNA的相对表达量.结果 异基因LEW→BN组出现急性排斥反应,ALT、AST排斥组均高于耐受组(均P＜0.05).RAI评分排斥组高于耐受组(均P ＜0.05).PD-L1扩增效率为98.8％,相关系数为0.996；溶解曲线为特异单峰；变异系数小于2.0％；移植肝中PD-L1 mRNA相对表达为耐受组[(0.95±0.10)×10-2]高于排斥组[(0.81±0.09)×10-2],差异有统计学意义(t=2.62,P=0.026).结论 成功建立了大鼠源PD-L1的real-time RT-qPCR检测方法,耐受组PD-L1的高表达提示其可能有利于大鼠移植肝的存活,为研究肝移植免疫耐受奠定了理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李涛	新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心	68	236	8.0	11.0
2	赵晋明	新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心	69	409	11.0	16.0
3	林仁勇	新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室	64	328	11.0	16.0
4	王俊华	新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室	19	40	4.0	6.0
5	巫姜	新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室	1	3	1.0	1.0
6	刘向伟	新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心	1	3	1.0	1.0