人 nestin第二内含子荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

• 作者: 安靓 朱媛媛
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: nestin 第二内含子 载体构建 双荧光报告
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 649-651,697
• 分类号: R73
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含有人nestin第二内含子的荧光素酶报告基因并检测其活性.方法 从NCBI数据库获得nestin 的DNA全长序列(NC_000001),用vector NTI软件分析找到其第二内含子位置,通过PCR的方法从人血全基因组DNA中钓取nestin的第二内含子全长片段,克隆到报告基因pGL3-promoter载体上,将报告基因载体转染至293T细胞,采用双荧光素酶报告基因系统评估第二内含子的活性.结果 成功钓取nestin第二内含子片段,长度为1 688 bp,测定其DNA序列正确.瞬时转染293T细胞,经双荧光报告实验显示转染了pGL3-nes-promoter载体的细胞其相对荧光素酶活性相比于空载组,大约提高了3.39倍,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 成功构建了含有nestin第二内含子的荧光素酶报告载体,为进一步研究nestin的调控机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	安靓	南方医科大学肿瘤研究所教育部和广东省共建重大疾病转录组与蛋白组学重点研究室	35	130	6.0	9.0
2	朱媛媛	南方医科大学肿瘤研究所教育部和广东省共建重大疾病转录组与蛋白组学重点研究室	1	3	1.0	1.0