猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用

• 作者: 李彬 李文良 毛立 江杰元 甘源 茅爱华
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 E2 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 8-13
• 分类号: S852.651
• 字数: 4813字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2012.05.002

摘要

采用RT-PCR方法扩增猪瘟病毒(CSFV) E2蛋白主要抗原区基因,克隆入原核表达载体pET32a(+),转化大肠埃希菌BL2l构建重组表达菌,经SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白得到成功表达.利用纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,建立了间接ELISA抗体检测方法.ELISA抗原最适包被浓度为0.5μg/mL(0.05 μg/孔),最佳封闭液为5 g/L BSA,待检血清最适稀释度为1∶100,作用时间为lh,酶标抗体最适稀释度为1∶2 000,最适作用时间为45 min,室温显色10 min.用该方法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)阳性血清结果均为阴性；批内和批间重复试验变异系数分别＜5％和＜8％,表明本方法具有较好的特异性和重复性.应用△E2-ELISA对350份血清样品进行检测,阳性率为77.71％,高于IDEXX试剂盒检测阳性率(67.14％),与IDEXX试剂盒阳性符合率91.06％,阴性符合率50％,总符合率77.43％.表明本试验建立的间接ELISA方法适于临床CSFV血清抗体的检测.