一种华支睾吸虫亲肌素样基因的克隆、表达与免疫学功能初步研究

• 作者: 余新炳 徐劲 李文芳 李然 胡月 黄艳
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 华支睾吸虫 亲肌素样蛋白 基因克隆 免疫原性 免疫组化
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 639-643,封4
• 分类号: R383.21
• 语种: 中文

摘要

目的 对新发现的华支睾吸虫亲肌素样蛋白(CsMLP)进行克隆、原核表达,初步了解其重组产物的免疫学功能.方法 应用生物信息学分析软件,分析CsMLP的序列特点和基本理化特征；将CsMLP基因克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,诱导表达并用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,用纯化的CsMLP蛋白免疫SD大鼠获得抗血清;用Western blot进行免疫反应性及免疫原性分析；应用免疫荧光方法观察CsMLP在华支睾吸虫成虫的定位.结果 该cDNA序列全长为900 bp,编码190个氨基酸,具有Calponin功能域；PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a (+)-CsMLP重组质粒构建成功;SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中获得高效表达,分子量为21 300 Mr;经亲和层析获得了高纯度蛋白；重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清、感染了华支睾吸虫的SD大鼠血清识别；CsMLP主要定位于虫体富含肌肉组织的口、腹吸盘、咽部,在表膜、肠壁也有分布.结论 CsMLP可在原核表达系统中呈现高效的可溶性表达,具有免疫原性,其主要分布在华支睾吸虫肌肉丰富的组织.