一种高选择性、高效的牛视网膜微血管内皮细胞培养方法

• 作者: 戴智育 杨霞 王征 程锐 陈大伟 陈少波 高国全 齐炜炜
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 视网膜 微血管 内皮细胞 细胞培养
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 1-3,21
• 分类号: R392.116
• 语种: 中文

摘要

目的 建立一种高效、可行、特异性高的牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)培养方法.方法 取新鲜牛眼,分离视网膜并用DMEM进行冲洗、匀浆剪碎,过75μm筛,将滤网上滤渣转移至50 ml离心管,用I型胶原酶、DNaseI及蛋白酶等多种酶混合液消化20 min,人血清中和后,过46μm网筛并冲洗,离心5 min,将组织扣在培养皿中,转入15 ml离心管,用10％人血清含生长因子ECGS的DMEM培养液培养于25 cm2,选择性培养视网膜血管内皮细胞,接种于明胶包被培养瓶中,采用ECGS配合肝素培养液促进内皮细胞生长,观察细胞形状生长特性,并用免疫化学荧光方法进行鉴定.结果 选择性培养视网膜微血管内皮细胞成单层、镶嵌铺路石状生长,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测为阳性纯度均大于95％以上,将细胞种在凝固的基质胶表面,12～18 h形成官腔结构.结论 本方法过程简单、可靠,培养的内皮细胞纯度高,生长状态良好,稳定传代,为视网膜血管生成疾病研究建立了模型.