葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立

• 作者: 任芳 张尊平 李亚惠 范旭东 董雅凤
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多重RT-PCR 检测 葡萄卷叶伴随病毒3 沙地葡萄茎痘病毒 葡萄病毒B 葡萄病毒A
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 949-956
• 分类号: S663.1
• 语种: 中文

摘要

以复合感染4种病毒的‘红地球’（Red Globe）葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3（Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3）、沙地葡萄茎痘相关病毒（Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV）、葡萄病毒B（Grapevine virusB,GVB）和葡萄病毒A（Grapevine virusA,GVA）的多重RT-PCR方法。灵敏度测验结果显示,多重RT-PCR与单一RT-PCR检测灵敏度基本一致。多重RT-PCR获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196bp,经过克隆、测序及序列比对,表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明,所建立的多重RT-PCR技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。