人工锌指蛋白随机库的构建及其在锌指核酸酶筛选中的应用

• 作者: 任刚 张智英 李战伟 杨涵江 王令 王昕
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 开源式方法 锌指蛋白 细菌双杂交 锌指核酸酶
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 页码范围: 1-10
• 分类号: Q812
• 字数: 9205字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1389.2012.01.001

摘要

利用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP).以已知三锌指蛋白为框架,使单个锌指关键位点氨基酸编码序列产生随机突变,构建3个人工锌指蛋白随机库,建立和完善应用人工锌指蛋白随机库筛选特异性锌指蛋白的技术平台.以人DYRK1A基因为例,测试和验证该技术平台的可行性和效率,分别获得对DYRK1A基因靶序列中左侧和右侧位点具有较高亲和性的50个三锌指蛋白；然后将得到的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ连接,构建DYRK1A锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN),应用酵母验证系统测试DYRK1A锌指核酸酶的活性,结果表明,90％的组装锌指核酸酶能够在靶位点进行切割.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王昕	西北农林科技大学动物科技学院	46	439	11.0	20.0
2	张智英		28	36	4.0	4.0
3	李战伟	西北农林科技大学动物科技学院	2	3	1.0	1.0
4	任刚	西北农林科技大学动物科技学院	4	10	2.0	3.0
5	王令	西北农林科技大学动物科技学院	6	10	2.0	3.0
6	杨涵江	西北农林科技大学动物科技学院	3	3	1.0	1.0