TRAIL和HN基因融合表达重组腺病毒的构建及其对DT40细胞的抑瘤作用

• 作者: 孙颖 金天明 高静
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: TRAIL-2A-HN融合基因 重组腺病毒,禽淋巴白血病细胞 抑瘤作用
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1-6
• 分类号: S895.79
• 字数: 4493字
• 语种: 中文

摘要

分析携TRAIL和HN基因的重组腺病毒在DT40细胞中的表达规律及杀伤肿瘤细胞的生物学效应.通过RT-PCR分别从鸡外周血淋巴细胞和新城疫病毒(NDV) LaSota株中扩增出TRAIL和HN基因.通过定点突变和重叠延伸拼接法实现TRAIL和HN基因的2A连接,将获得的目的基因克隆到pShuttle-CMV穿梭载体中,与pAdeasy-1载体在BJ5183细菌内同源重组,构建了包含目的基因的重组腺病毒质粒pAd-TRAIL和pAd-TRAIL-2A-HN,将质粒线性化后转染AD293细胞,包装后的重组腺病毒,经RT-PCR检测、荧光显微镜观察和病毒滴度测定后,将获得的重组腺病毒体外转染禽淋巴白血病DT40细胞,通过RT-PCR和Western blotting检测重组腺病毒的感染性和外源基因的表达情况,采用流式细胞仪检测重组腺病毒对DT40细胞生长的影响以及Ad-TRAIL和Ad-TRAIL-2A-HN对DT40细胞的凋亡作用.PacⅠ酶切证实同源重组成功；RT-PCR、荧光显微镜检测证实重组腺病毒质粒成功导入AD293细胞中H具有良好的感染性,滴度为1.9×1010 PFU/mL; Western blot检测结果显示,TRAIL-linker-HN基因能够在DT40细胞中稳定表达并对DT40细胞产生细胞毒作用,且诱导细胞的凋亡率为29.52％,表明TRAIL-linker-HN具有双基因抑瘤的协同效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙颖	天津农学院动物科学系	7	6	1.0	2.0
2	金天明	天津农学院动物科学系	74	139	6.0	9.0
3	高静	天津农学院动物科学系	3	1	1.0	1.0