咖啡ISSR与RAPD-PCR反应体系优化

• 作者: 王晓阳 范睿 董云萍 谭乐和 闫林 陈鹏 黄丽芳
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 咖啡 ISSR RAPD 均匀设计 体系优化
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 854-859
• 分类号: S571.2
• 字数: 4043字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2012.05.014

摘要

以中粒种咖啡部分种质为试材,采用U25(55)均匀设计表,对影响ISSR和RAPD标记的模板DNA、Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶和引物浓度5个因素进行优化,分别建立适合于中粒种咖啡ISSR-PCR和RAPD-PCR标记的反应体系.结果表明:2种标记的反应体系相似,20 μL的反应体系中含DNA模板20 ng,Mg2+1.5 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,Taq酶1.25 U,引物0.6 μmol/L.利用所确立的体系对13份中粒种咖啡种质进行扩增,结果条带清晰明亮,多态性好.