丙型肝炎病毒核心蛋白稳定表达肝癌细胞株的构建及生物学研究

• 作者: 刘娇 单晓亮 周帆 唐霓 权会琴 陈庆美 陈林林
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 核心蛋白 生物学功能 稳定细胞株 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 99-103
• 分类号: R735.7
• 字数: 3203字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建稳定表达HCV核心蛋白的稳定细胞系Huh7-Core并进行初步的生物学功能研究.利用PCR技术扩增HCV核心蛋白基因,通过酶切连接反应将目的基因克隆至载体pSEB-3Flag中,将重组质粒pSEB-3F-Core和辅助质粒pAmpho共转染Huh7细胞,经过Blasticidine抗性筛选,建立稳定表达HCV核心蛋白的肝癌细胞系Huh7-Core.采用RT-PCR、Western blot鉴定Huh7-Core细胞株中核心蛋白的稳定表达并采用MTS、结晶紫试验观察Huh7-Core稳定细胞株的增殖情况.结果显示,成功构建了表达HCV核心蛋白的稳定细胞株Huh7-Core.结晶紫、MTS试验证实Huh7-Core细胞较Huh7-3Flag细胞增殖速度增快,表达HCV核心蛋白的Huh7-Core稳定细胞株构建成功,Core稳定表达后可促进Huh7细胞生长速度.