大鼠促红细胞生成素重组腺病毒载体的构建及其在大鼠SGNs中的表达

• 作者: 姜振东 张学渊 钟诚
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 促红细胞生成素 腺病毒 构建
• 年，卷（期）: 2012,（18）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1818-1821
• 分类号: R339.16|R394-33|R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 构建大鼠促红细胞生成素( erythropoietin,EPO)重组腺病毒载体,并转染于体外培养的大鼠螺旋神经元( spiral ganglion neurons,SGNs).方法 全基因合成大鼠EPO基因,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-EPO.经酶切、PCR及测序鉴定,再经Pac Ⅰ酶切线性化后电转化感受态细胞,获得重组腺病毒载体pAdTrack-CMV-EPO,经PacⅠ酶切后转染至293细胞进行包装,制备重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度测定及RT-PCR和Western blot鉴定.并转染至体外培养的螺旋神经元,免疫荧光检测及蛋白水平检测螺旋神经元中EPO表达.结果 经KpnⅠ、HindⅢ酶切与测序鉴定显示,腺病毒载体pAdTrack-CMV-EPO构建成功,重组腺病毒AdEPO在293细胞中成功包装,扩增后病毒滴度为1.17×1011U/ml;经RT-PCR和Western blot检测EPO在293细胞中成功表达.重组腺病毒载体AdEPO经鉴定均构建正确；免疫荧光及Western blot检测转染腺病毒后螺旋神经元中EPO表达显著增强.结论 成功构建了EPO重组腺病毒载体,并成功转染螺旋神经元,可显著增强螺旋神经元中EPO表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学渊	第三军医大学西南医院耳鼻咽喉头颈外科	114	486	11.0	18.0
2	钟诚	第三军医大学西南医院耳鼻咽喉头颈外科	45	164	6.0	11.0
3	姜振东	第三军医大学西南医院耳鼻咽喉头颈外科	26	144	6.0	11.0