猪主要DNA病毒多重二温式PCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: 姜平 徐丽华 李军星 王一成 申世川 袁秀芳
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: PPV PRV PCV2 多重二温式PCR
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 60-64
• 分类号: S858.28
• 字数: 4478字
• 语种: 中文

摘要

通过对GenBank发布的猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的核苷酸序列进行比对分析,找出PPV的VP2基因,PRV的gH基因和PCV2的ORF2基因的相对保守区域.利用生物学软件在保守序列分别设计高溶解温度引物,将常规三温式PCR过程中的退火与延伸合并为一步,通过对PCR反应条件的优化,确定最佳引物浓度、最佳聚合酶浓度、最佳退火温度以及最佳反应体积,建立了多重二温式PCR方法检测PPV、PRV和PCV2,其扩增的目的片断大小分别为PPV( 142 bp)、PRV (300 bp)和PCV2 (469 bp),从而节省临床检测时间,同时又能通过一个反应体系对PPV、PRV和PCV2 3种猪主要DNA病毒进行检测.用30份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为95％以上.表明建立的多重PCR检测方法,具有高度特异、快速、敏感等特点,可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜平	南京农业大学动物医学院	186	1921	25.0	35.0
2	王一成	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	61	386	11.0	16.0
3	袁秀芳	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	65	353	11.0	15.0
4	徐丽华	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	57	355	11.0	16.0
5	李军星	浙江省农业科学院畜牧兽医研究所	35	167	8.0	11.0
6	申世川	南京农业大学动物医学院	7	33	3.0	5.0