鹅β-防御素10基因的分离、鉴定与表达

• 作者: 刘胜旺 周财源 张名岳 邵昱昊 韩宗玺 马得莹
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅AvBD10 克隆 遗传进化分析 组织表达 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 999-1009
• 分类号: S835
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.05.022

摘要

[目的]从鹅的组织中克隆鹅β-防御素10 (avianβ-defensin10,AvBD10)基因,通过大肠杆菌进行原核表达,检测重组鹅AvBD10蛋白的生物学特性.[方法]采用RT-PCR方法,从鹅的肾脏组织中扩增鹅AvBD10基因.根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建系统进化树,进行遗传进化分析;并应用荧光定量的方法对该基因的组织表达水平进行鉴定.将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,并对该重组蛋白进行纯化,测定体外生物学活性.[结果]从鹅肾脏组织中克隆出了鹅AvBD10基因,该基因的cDNA大小为207 bp,编码68个氨基酸.经遗传进化分析表明,该基因推导的氨基酸序列与鸭AvBD10的同源性最高,达92.7％.通过对重组蛋白抗菌活性的检测发现,该蛋白对12种致病性细菌均具有较强抑菌作用,但在高盐离子浓度下活性减弱.并且重组蛋白不具有溶血的特性.[结论]成功克隆并表达了鹅AvBD10基因,原核表达产物具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性.