乙型肝炎病毒X蛋白通过降低P4启动子甲基化水平上调人IGF-II基因的转录

• 作者: 吴小娟 周鸿科 张嫚嫚 张良鹏 曹明溶 汤绍辉 王旷靖 罗羽宏
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒X蛋白 胰岛素样生长因子II 启动子 DNA甲基化
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1633-1638
• 分类号: R735
• 字数: 4713字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2012.09.017

摘要

目的:构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝癌细胞株HepG2-HBx,探讨HBx对胰岛素样生长因子 II(IGF-II)基因P4启动子甲基化水平及转录表达的影响.方法:应用基因重组技术,构建含HBx基因的重组逆转录病毒载体pBABE-puro-HBx,采用磷酸钙共沉淀法将其转染293FT包装细胞产生逆转录病毒,感染HepG2肝癌细胞,采用嘌呤霉素进行阳性克隆筛选,Western blotting鉴定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx.采用亚硫酸氢盐测序法及实时荧光定量RT-PCR检测HepG2-HBx细胞中P4启动子甲基化水平及P4 mRNA表达水平变化.进一步将体外甲基化的人IGF-II基因P4启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P4及含HBx基因的pCMV-tag2B-X质粒共转染HepG2肝癌细胞,采用亚硫酸氢盐测序法及双萤光素酶实验检测pGL3-P4载体上P4启动子甲基化水平及转录调控活性变化.结果:(1)经Western blotting鉴定,成功构建了稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx;(2)表达HBx蛋白的HepG2-HBx细胞中P4启动子甲基化CpG位点的比例(9.0%)明显低于对照细胞HepG2-control(25.0%)(P<0.01),而其P4 mRNA表达水平则为对照细胞HepG2-control的2.8倍;(3)共转染pCMV-tag2B-X质粒的HepG2细胞中pGL3-P4载体上P4启动子甲基化CpG位点的比例(60.8%)明显低于共转染对照质粒pCMV-tag2B的HepG2细胞(84.1%)(P<0.01),而前者P4启动子相对萤光素酶活性(14.12±0.89)则明显高于后者(4.61±0.76)(P<0.01).结论:HBx蛋白可降低IGF-II基因P4启动子甲基化水平,进而上调其转录表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汤绍辉	暨南大学附属第一医院消化科	164	444	9.0	14.0
2	罗羽宏	暨南大学附属第一医院普通外科	33	174	8.0	11.0
3	周鸿科	暨南大学附属第一医院消化科	16	54	5.0	6.0
4	王旷靖	暨南大学附属第一医院消化科	10	33	3.0	5.0
5	吴小娟	暨南大学附属第一医院消化科	12	41	4.0	6.0
6	张嫚嫚	暨南大学附属第一医院消化科	8	26	3.0	5.0
7	张良鹏	暨南大学附属第一医院消化科	6	17	3.0	3.0