锌螯合物抗体可变区的克隆鉴定、真核表达及重组抗体的三维模建

• 作者: 刘凤权 李霞 李鹏 杨慧 赵丽
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 重金属 单克隆抗体 免疫学检测 序列分析 三维模拟
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 108-115
• 分类号: R392.1
• 字数: 6726字
• 语种: 中文

摘要

筛选得到能分泌抗锌(Ⅱ)-二乙烯三胺五乙酸( Zn(H)-DTPA)的单克隆抗体杂交瘤细胞株2E8E3.经测定,此株细胞分泌IgM,轻链K型抗体.为了得到该抗体可变区序列,分别在小鼠抗体的信号肽区域和抗体的第一恒定区半胱氨酸残基(Cys)附近选择合适引物,通过RT-PCR方法,得到重(VH)、轻(V1)链可变区序列.将序列进行BLAST分析、SignalP分析、IMGT-V/QUEST分析,结果显示,克隆到的VH-2E8E3( 465 bp)和VL-2E8E3( 417 bp),序列与小鼠μ重链,κ轻链抗体可变区序列具有同源性(相似度＞97％),前端序列符合信号肽特征,抗体骨架区( Framework region,FR)及第一恒定区均含有保守半胱氨酸(Cys)残基.在此基础上,构建了重组抗体的真核表达载体,转染293T细胞并用间接ELISA法初步验证其具有表达活性.对重组抗体进行了三维模拟,并推测了主要氨基酸残基.试验结果表明,克隆到了正确的2E8E3抗体可变区序列并初步鉴定为有活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘凤权	南京农业大学植物保护学院	44	845	17.0	28.0
2	李鹏	南京农业大学植物保护学院	22	273	9.0	16.0
4	杨慧	北京市农林科学院蔬菜研究中心	9	145	6.0	9.0
5	赵丽	北京市农林科学院蔬菜研究中心	4	27	3.0	4.0
6	李霞	北京市农林科学院蔬菜研究中心	9	56	5.0	7.0