自身启动子控制的卡那霉素抗性基因在哺乳动物细胞中表达的检测

• 作者: 吉玉辉 孙怀昌 张鑫宇 易明梅 朱建国 翁玉根 袁耀明
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌 卡那霉素抗性基因 重组载体 细胞表达 奶牛
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 9-13
• 分类号: S858.23|S852
• 字数: 5164字
• 语种: 中文

摘要

为了研究卡那霉素抗性(KanR)基因能否在哺乳动物细胞中表达以及用含相同抗性基因重组质粒防治奶牛乳腺炎的安全性,用PCR从重组质粒p215C3LYZ中扩增得KanR基因,将其克隆入原核表达载体pQE-31,用含卡那霉素(Kan)琼脂平板筛选得KanR重组菌,经IPTG诱导成功表达了预期大小的Kan抗性融合蛋白；用纯化的重组蛋白免疫小鼠,获得了Kan抗性蛋白抗血清,经Western blotting证明免疫血清特异性良好；分别用重组质粒pQE-Kan和p215C3LYZ转染COS-I细胞,在不含抗生素培养液中培养后分别收集细胞上清和细胞裂解物；将转染细胞上清分为添加和不加Kan组,接种Kan敏感菌DH5α大肠杆菌,培养物的OD600检测结果显示,添加组的指示菌生长被抑制,转染细胞上清中无Kan 抗性蛋白表达；以Kan抗性蛋白免疫血清进行的Western blotting结果显示,转染细胞内无Kan抗性蛋白表达；将p215C3LYZ注射奶牛乳腺,用脱脂和浓缩奶样进行Western blotting检测,结果显示试验牛乳中也无Kan抗性蛋白表达.这些试验结果提示,来源于原核大肠杆菌的KanR基因启动子在动物细胞中无转录活性,乳腺注射含KanR基因的重组质粒不会表达对奶牛和人体有害的Kan抗性蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学兽医学院	138	1042	15.0	25.0
2	张鑫宇	扬州大学兽医学院	40	142	6.0	10.0
3	朱建国		103	607	13.0	20.0
4	袁耀明		30	295	8.0	16.0
5	易明梅		6	81	3.0	6.0
6	翁玉根	扬州大学兽医学院	1	1	1.0	1.0
7	吉玉辉	扬州大学兽医学院	2	2	1.0	1.0