miR-1、miR-16和miR-208前体在乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞中的表达

• 作者: 余细勇 单志新 朱杰宁 林秋雄 符永恒 郭林林 黄帅
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 心肌细胞 心肌成纤维细胞 微小RNA 半定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 123-126
• 分类号: R966
• 语种: 中文

摘要

目的 检测心肌特异的miR-1、miR-16和miR-208前体在乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中的表达.方法 利用出生1～3 d的Sprague-Dawley (SD)大鼠和C57BL/6小鼠,采用2.5％胰酶消牝和差速贴壁法分离心肌细胞和心肌成纤维细胞.提取原代的乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及P1代的心肌成纤维细胞总RNA,以β-actin为内参照,逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测miR-1、miR-16和miR-208的前体表达水平.用FluorChem8900软件分析琼脂糖凝胶电泳后PCR产物条带的灰度值,计算出表达的目的miRNA前体与β-actin的比值.结果 有效分离并培养了乳C57BL/6小鼠、乳SD大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞.RT-PCR结果显示,在乳SD大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中miR-1和miR-16均有相近水平的表达；心肌细胞中miR-208的表达显著低于miR-208b(P＜0.01),miR-208b在心肌细胞中的表达显著高于其在心肌成纤维细胞中的表达(P＜0.05).乳C57BL/6小鼠心肌细胞中miR-1a-1的表达显著低于miR-1a-2(P＜0.01),而miR-1a-2在心肌细胞和心肌成纤维细胞中的表达水平一致；miR-16-1在心肌细胞和心肌成纤维细胞中表达水平相近,而miR-16-2在两种细胞中均不表达；心肌细胞中miR-208a和miR-208b表达水平差别不明显,心肌成纤维细胞中只有miR-208a表达,并且在水平上低于其在心肌细胞中的表达(P＜0.05).结论 miR-1、miR-16和miR-208前体在乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中呈细胞特异性的表达.