pGL3-Claudin-1promoter荧光素酶报告基因质粒的构建及其功能鉴定

• 作者: 万远廉 刘玉村 王洪波 王鹏远
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 转录因子 Claudin-1 重组质粒 基因 组织工程
• 年，卷（期）: 2012,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5251-5254
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 3286字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.28.025

摘要

背景:Claudin-1是一种多功能蛋白,除了组成紧密连接封闭细胞间隙,它在转录水平的表达失调可能作为一种分子标志反映到恶性肿瘤的侵袭转移和预后中.目的:构建重组大鼠重组Claudin-1萤光素酶报告基因质粒.方法:设计和合成包含5'非转录区的约2 000 bp的脱氧核糖核酸链,经过限制性内切酶KpnⅠ和MluⅠ酶切后插入到pGL3-Basic载体中,并用感受态E.coli DH5α和Pmd18-T-simple载体筛选阳性样品.阳性克隆通过测序和PCR证实.实验分为4组:对照组,阳性对照组(pGL3-promoter质粒转染),阴性对照组(转染pGL3-Basic质粒),实验组(转染pGL3-Claudin-1 promoter质粒).将质粒转染293T细胞检测Claudin-1启动子活性.结果与结论:重组质粒DNA测序结果采用NCBI blast比对与GenBank(gi162750811)中大鼠Claudin-1基因启动子序列完全匹配.重组萤光素酶报告基因转录活性检测与pGL3-Basic质粒相比,重组pGL3质粒转录活性明显增强 (P < 0.001).经过测序和转染结果证实有效的pGL3-Claudin-1启动子质粒构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王鹏远	北京大学第一医院普外科	56	299	10.0	16.0
2	刘玉村	北京大学第一医院普外科	163	1401	19.0	29.0
3	万远廉	北京大学第一医院普外科	166	1729	21.0	30.0
4	王洪波	北京大学第一医院普外科	43	85	5.0	7.0