真核过表达载体共转染3个胰岛发育关键基因在小鼠胎肝细胞内的表达

• 作者: 于静雯 张振 徐艳花 杨锐 陈宏 陈容平
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 胰十二指肠同源框蛋白 神经源素3 V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A 脂质体转染 BNL CL.2细胞株 胰岛细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2012,（18）
• 所属期刊栏目: 移植于基因
• 页码范围: 3310-3313
• 页数: 4页
• 分类号: R318
• 字数: 3434字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.18.018

摘要

背景:大量文献表明,向肝脏细胞引入一个多个胰岛发育的关键因子(如Pdx1、MafA及Ngn3)可以使肝细胞向胰岛细胞的方向进行转化.目的:构建以pcDNA3.1(+)为骨架的质粒载体并共同转染胰十二指肠同源框蛋白(Pdx1)、神经源素3(Ngn3)及V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(MafA)至小鼠胎肝细胞并检测其表达情况.方法:以基因组或小鼠胰腺cDNA为模板扩增Pdx1、MafA及Ngn3三个目的基因,应用分子生物学技术,将3个目的片段克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆位点中,构建小鼠系列真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafA ORF,pcDNA3.1(+)-Pdx-1 ORF,pcDNA3.1(+)-Ngn3 ORF通过Lipofectamine2000介导的脂质体转染小鼠胎肝细胞系BNL CL.2,用反转录PCR以及间接免疫荧光法检测3个目的基因的表达情况.结果与结论:目的基因克隆正确,反转录PCR,间接免疫荧光法证实了脂质体转染后小鼠胎肝细胞中有Pdx1、Ngn3以及MafA的表达.结果表明,真核过表达载体pcDNA3.1(+)-MafA ORF,pcDNA3.1(+)-Pdx-1 ORF,pcDNA3.1(+)-Ngn3 ORF可成功构建,并能够将Pdx1、Ngn3以及MafA三个基因转至小鼠胎肝细胞进行表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈宏	南方医科大学附属珠江医院内分泌科	130	728	14.0	21.0
2	张振	南方医科大学附属珠江医院内分泌科	74	345	10.0	14.0
3	陈容平	南方医科大学附属珠江医院内分泌科	61	456	12.0	18.0
4	杨锐	南方医科大学附属珠江医院内分泌科	58	432	10.0	18.0
5	徐艳花	南方医科大学附属珠江医院内分泌科	6	17	2.0	4.0
6	于静雯	南方医科大学附属珠江医院内分泌科	1	1	1.0	1.0