重组腺病毒Ad-P2G-DCN的构建及在HEK-293细胞中的表达

• 作者: 杨飞华 胡厚稳 蔡绍晖 马伟峰
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 基质细胞衍生因子 饰胶蛋白聚糖 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1097-1100
• 分类号: R346
• 字数: 3861字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2012.08.026

摘要

目的 制备表达基质细胞衍生因子(SDF-1)拮抗剂P2G与饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌合基因的重组腺病毒,并检测其在HEK-293细胞中的表达情况.方法 以前期构建的pET-30a+/P2G-DCN为模板,PCR扩增目的 基因P2G-DCN,并克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV;然后将化学合成的SDF-1信号肽序列插入P2G-DCN的5′端,构建为重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;经PmeⅠ酶切线性化,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAd-SP-P2G-DCN.PacⅠ酶切线性化的pAd-SP-P2G-DCN通过脂质体介导转染人胚肾转化细胞系HEK-293,包装并扩增重组腺病毒Ad-P2G-DCN.荧光计数确定病毒感染滴度,并以Western blot法检测嵌合蛋白P2G-DCN在HEK-293细胞中的表达情况.结果 构建了携带P2G-DCN基因的重组腺病毒,该重组腺病毒感染HEK-293细胞后可高效分泌表达重组嵌合蛋白P2G-DCN.结论 成功构建了重组腺病毒Ad-P2G-DCN,为后续系统研究Ad-P2G-DCN在肿瘤基因治疗中的作用奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡绍晖	暨南大学药学院	63	488	11.0	19.0
2	杨飞华	南方医科大学公共卫生与热带医学学院	5	17	3.0	4.0
3	马伟峰	南方医科大学公共卫生与热带医学学院	14	51	4.0	6.0
4	胡厚稳	温州医学院药学院	1	3	1.0	1.0