抗真菌KP4蛋白的原核表达载体构建与表达

• 作者: 冯翠莲 孔冉 张树珍 李晓君 郭婷
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: KP4 包涵体 温度 IPTG 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 11-14
• 页数: 4页
• 分类号: Q812
• 字数: 4444字
• 语种: 中文

摘要

为制备KP4的多克隆抗体,将KP4编码框克隆到pMD19-T中,载体经测序后,亚克隆到原核表达载体pET32a中,获得了KP4的原核表达载体PET-KP4.将构建成功的KP4原核表达载体转化宿主菌BL21( DE3)并用IPTG对重组菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析诱导后重组菌的总蛋白显示,融合蛋白大小约为31 ku,以包涵体形式存在;对融合蛋白的表达条件进行了优化,KP4大量表达最佳培养温度为37℃,诱导剂IPTG的最佳浓度为1.0 mmol/L,最佳诱导培养时间为8h;对目标蛋白进行包涵体破碎,用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析对总蛋白进行了纯化.SDS-PAGE电泳分析与蛋白浓度测定结果显示,目的蛋白纯度好,浓度达到了236μg/mL.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯翠莲	中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心	14	78	6.0	8.0
2	孔冉	海南大学农学院	1	0	0.0	0.0
6	李晓君	海南大学农学院	3	13	1.0	3.0
10	郭婷	海南大学农学院	2	1	1.0	1.0