尼罗罗非鱼MyD88基因荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 李大宇 杨弘 王倩 祝璟琳 肖炜 邹芝英
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 MyD8 β-actin 实时荧光定量PCR 2 -△△Ct分析方法
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 水产—应用研究
• 页码范围: 92-97
• 分类号: Q7
• 字数: 4564字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6850.2012.05.018

摘要

为了准确分析尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)髓样分化因子(myeloid differentiation factor 88,MyD88)在天然免疫反应中的作用,根据MyD88 EST序列(GenBank登录号:GR679416.1)和β-actin基因序列(GenBank登录号:AB037865.1),分别在保守区域设计并合成引物.实验利用5倍系列稀释的尼罗罗非鱼肝脏cDNA样品构建标准曲线并进行融解曲线分析,建立尼罗罗非鱼MyD88的SYBR Green Ⅰ荧光实时定量PCR检测方法.应用2-△△Ct分析方法初步检测了尼罗罗非鱼肝脏、脾脏、血液和肌肉等不同组织中的MyD88相对表达量.扩增结果表明,MyD88和β-actin基因标准曲线G值检测范围分别为24～35和19～30,扩增效率分别为100％和96.7％,相关系数分别为0.998和0.995；熔解曲线分析显示产物均形成单一特异峰,Tm值分别为78.5℃和77.5℃.定量分析结果显示,MyD88基因在参与机体免疫的相关组织肝脏、脾脏和血液中高丰度表达.