癌胚抗原T、B细胞表位短肽诱导特异性体液免疫反应研究

• 作者: 吴乐 应江辉 张丽芳 朱冠保 朱珊丽 肖德双 蒋佩佩 薛向阳 邵欢义 陈江
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 癌胚抗原 预测 ELISA 融合蛋白 CTL
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 65-68
• 分类号: R392
• 字数: 4549字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-548X.2012.04.020

摘要

目的 筛选癌胚抗原含T、B细胞表位的短肽并分析其诱导机体产生体液免疫的特性.方法 利用免疫信息学方法预测CEA CTL表位,结合我们早期对CEA B表位预测的结果,选择含多个CTL表位肽和B表位肽的CEA氨基酸序列580～598处短肽作为目的基因.目的基因密码子优化后采用pET32a(+)原核表达系统表达融合蛋白,经SDS - PAGE和Western blot-ting鉴定融合蛋白的抗原性；经镍整合亲和层析柱(Ni - NTA Agarose)纯化CEA580～598全长融合蛋白,纯化蛋白用佐剂乳化后经日本大耳白家兔背部皮下多点免疫注射,采用Western blotting检测血清抗体的特异性,采用ELISA法检测血清抗体水平及变化趋势.结果 含多个T、B细胞表位的短CEA580～598在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量占总蛋白的25.6％；表达产物的相对分子质量(Mr)约21kDa,与预期Mr相符；Western blotting分析结果显示,在21kDa处出现特异性条带.日本大耳白兔经CEA580～598融合蛋白免疫后产生高水平的特异性抗体,与空载体和PBS对照组比较具有显著性差异(P＜0.05),制备的免疫血清不但能特异识别CEA580～598短肽,而且能特异识别天然CEA抗原.结论 CEA580～598短肽融合蛋白具有较强的免疫原性,诱导的兔免疫血清能特异性结合CEA抗原,为基于CEA表位疫苗的研究奠定理论和实验基础.