H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白表达影响因素分析

• 作者: 张志珍 李国明 李观强
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 禽流感 H5N1 NS1融合蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1-5
• 分类号: R511.7
• 语种: 中文

摘要

目的 优化高表达禽流感病毒NS1蛋白的实验方法.方法 将基因工程菌接种LB培养基,设定IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导温度为37℃,诱导表达6.0h,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况,确定最佳诱导时间.以0.1mmol/L为梯度,设置不同IPTG诱导浓度,37℃诱导4.0h,分析融合蛋白表达,确定最佳IPTG诱导浓度.设定IPTG至终浓度为0.6mmol/L,分别于24℃、28℃、32℃、37℃和42℃下诱导表达4.0h,分析融合蛋白表达,确定最适诱导温度.采用最优表达条件,超声裂菌后SDS-PAGE分析融合蛋白,Western blotting对融合蛋白进行鉴定.结果 当培养温度为37℃,IPTG浓度为0.3mmol/L时,融合蛋白GST-NS1在IPTG诱导5.0h时的表达量最高,达28.5％；当IPTG诱导浓度为0.6mmol/L,在37℃诱导表达4.0h时,融合蛋白的表达量可达27.9％.选用优化的表达条件,IPTG 0.6mmol/L,37℃诱导表达4.0h,融合蛋白的表达量最高可达33.2％.进一步分析显示,融合蛋白大部分以可溶形式表达,其表达量可占菌体总蛋白的25.1％.经SDS-PAGE电泳、电转移后,用小鼠抗GST单克隆抗体进行免疫印迹分析,出现一条阳性反应带.结论 通过实验优化了工程菌诱导表达的最佳IPTG浓度、最适时间和培养温度,实现了融合蛋白的可溶性高表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张志珍	广东医学院生物化学与分子生物学教研室	29	51	4.0	5.0
2	李观强	深圳市龙岗区人民医院检验科	31	193	8.0	12.0
3	李国明	广东医学院微生物与免疫学教研室	72	360	10.0	14.0