CF-1小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的制备

• 作者: 卢海 孟镔 张志 江金群 潘明新 艾民 赵毅超 饶小惠 高毅
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎成纤维细胞 诱导多潜能分化干细胞 饲养层 丝裂霉素C 细胞集落
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 1786-1790
• 分类号: R394.2
• 字数: 5172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.017

摘要

背景:小鼠胚胎成纤维细胞作为干细胞生长用饲养层,优于无饲养层,它能够分泌一些既促进干细胞生长又能抑制干细胞分化的因子.目的:建立CF-1 小鼠胚胎成纤维细胞饲养层最佳的分离培养方法,分析丝裂霉素C 抑制成纤维细胞增殖的最佳浓度与时间,用于培养诱导多能性干细胞.方法:取孕10~15 d CF-1 小鼠,分离胎鼠原代成纤维细胞,经不同质量浓度(5,10,15,20 mg/L)丝裂霉素C 处理不同时间(1,1.5,2,2.5,3 h)制备饲养层,并观察其增殖情况.将人诱导多潜能干细胞或胚胎干细胞在丝裂霉素C 处理过的饲养层上培养,观察细胞集落生长情况.结果与结论:制备CF-1 小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄为13.0~14.0 d.丝裂霉素C 抑制CF-1 小鼠胚胎成纤维细胞增殖的最佳浓度及作用时间为10 mg/L,2.5 h,成纤维细胞饲养层可以维持5~7 d.诱导多能性干细胞与胚胎干细胞在经10 mg/L 丝裂霉素C 处理2.5 h 后饲养层上能发育成典型的"鸟巢"状干细胞集落.