RyR2-shRNA重组慢病毒载体的构建及其对离体心肌细胞RyR2基因表达的影响

• 作者: 朱涵 段萍 王前 王志举 穆永慧 章茜 赵伟达
• 来源期刊: 临床医学工程
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 RyR2 RNA干扰 新生小鼠
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1454-1456
• 分类号: R0
• 字数: 3350字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-4659.2012.09.1454

摘要

目的 构建携带RyR2 -shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠离体心肌细胞中RyR2的基因沉默效果.方法 设计并合成针对小鼠RyR2基因的shDNA,克隆入含U6启动子和EGFP报告基因的慢病毒载体psiHIV -U6 -eGFP,构建表达RyR2-shRNA的慢病毒载体,通过将慢病毒转移质粒和包装质粒共转染293T细胞,得到重组慢病毒载体颗粒,然后离体感染小鼠心肌细胞,采用Real-time PCR检测RyR2在mRNA水平的沉默效应.结果 经测序证实RNAi慢病毒载体构建成功并成功包装.流式细胞仪测得重组慢病毒感染小鼠心肌细胞的阳性率达80％以上.Real-time PCR证实,重组慢病毒Lenti-siRyR2感染的小鼠心肌细胞中RyR2在mRNA水平基因抑制率达90％以上.结论 成功构建了表达RyR2-shRNA的重组慢病毒表达载体,并在小鼠心肌细胞中实现有效的基因沉默效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱涵	郑州大学基础医学院生理学教研室	22	88	6.0	9.0
2	章茜	郑州大学基础医学院生理学教研室	55	186	8.0	10.0
3	王志举	郑州大学基础医学院生理学教研室	39	104	6.0	8.0
4	段萍	郑州大学基础医学院生理学教研室	14	25	4.0	4.0
5	赵伟达	河南大学生命科学院生物工程系	4	5	2.0	2.0
6	王前	郑州大学基础医学院生理学教研室	2	0	0.0	0.0
7	穆永慧	郑州大学基础医学院生理学教研室	3	2	1.0	1.0