裸鼠肝窦内皮细胞的分离、培养及鉴定

• 作者: 丁彦青 唐娜 张江宇 王红霞 胡纯婷 蒋强 邓永键
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 肝窦内皮细胞 裸鼠 CD146 免疫磁珠 von-Willebrand 因子
• 年，卷（期）: 2012,（15）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2789-2792
• 分类号: R318
• 字数: 3641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.028

摘要

背景:建立裸鼠肝窦内皮细胞的原代分离培养方法,进一步研究其生长特点及生物学特性.目的:建立裸鼠肝窦内皮细胞的原代分离、培养方法,并鉴定其纯度及观察其生物学特性.方法:无菌下摘除裸鼠肝脏,剪成 1 mm3 大小,Ⅳ型胶原酶在 37 ℃恒温下消化,应用CD146 免疫磁珠分选肝窦内皮细胞,在倒置显微镜观察内皮细胞形态及生长特性,用von-Willebrand 因子免疫细胞化学验证分选细胞的表面蛋白表达,鉴定肝窦内皮细胞的纯度,Hochest 33342 测定凋亡.结果与结论:分离的肝窦内皮细胞纯度达95%以上,活力好,光镜下可以看到典型的铺路石样形态,von-Willebrand 因子免疫细胞化学染色阳性.肝窦内皮细胞在体外培养3 周后凋亡.提示Ⅳ型胶原酶消化加CD146 免疫磁珠分选肝窦内皮细胞纯度高,方法可靠.