大豆KTi基因和BBi基因双价RNAi表达载体的构建

• 作者: 付永平 夏海峰 宋冰 王丕武 高玮
• 来源期刊: 农业机械
• 学科: 工学
• 关键词: 大豆 胰蛋白酶抑制剂KTi基因 BBi基因 RNAi表达载体 种子特异性启动子
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 页码范围: 74-77
• 页数: 4页
• 分类号: TS201.2

摘要

以KTi基因的ihpRNA种子特异性表达载体p7dP—GUS—KTiS为模板，采用PCR技术克隆含有KTi基因的完整ihpRNA构件，并将其克隆到pMDl8-T载体．对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析，并进行序列比对；然后以BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体p7aP—GFP—BBiS为基础．利用限制性内切酶BstXI单酶切，将KTi基因的完整ihpKNA构件连入其中。最后利用冻融法转化根癌农杆菌，并进行PCR鉴定。结果表明：PCR扩增得到含有KTi基因的完整ihpRNA构件．构建成重组克隆载体pMDl8－T—KRNAi，并构建成双价ihpRNA种子特异性表达载体pKTi—BBi—RNAi，并转化得到含有pKTi—BBi—RNAi的农杆菌EHAl05。成功构建同时具有大豆胰蛋白酶抑制剂KTi基因和BBi基因的双价RNAi种子特异性表达载体，KTi基因和BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入农杆菌中。