玉米淀粉分支酶SBEIIb基因片段酵母双杂交诱饵载体的构建及检测

• 作者: 刘忠野 刘晶 崔喜艳 韩琳
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 农学
• 关键词: 玉米 诱饵载体 SBEIIb 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2012,（15）
• 所属期刊栏目: 农学—研究报告
• 页码范围: 24-30
• 分类号: S188
• 字数: 4288字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6850.2012.15.006

摘要

为探寻玉米淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBEIIb)与其互作蛋白的作用位点,构建了酵母双杂交诱饵栽体.根据CDD和NCBI对SBEIIb蛋白氨基酸序列的分析,确定玉米SBEIIb的功能域及非功能域,PCR扩增功能域及非功能域基因的目的片段,经回收纯化,用相同的限制性内切酶将其与载体 pGBKT7进行双酶切后,分别将目的基因片段与载体pGBKT7进行连接.构建了酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),转化酵母菌AH109的菌液,OD600值在0.8以上,证明诱饵栽体 pGBKT7-SBEIIb-X对酵母菌AH109没有毒性作用；转化诱饵载体后的酵母菌AH109,在SD/-Trp/ X-α-Gal平板上长出白色菌落,在SD/-His/-Trp/X-α-Gal、SD/-Ade/-Trp/X-α-Gal平板上不能生长,排除了 pGBKT7-SBEIIb-X具有自激活宿主菌AH109的作用.构建的酵母双杂交诱饵栽体pGBKT7- SBEIIb-X (X=1,2,3,4,5,6),其表达对酵母细胞无毒性及对报告基因无自激活作用,可为下一步分析SBEIIb与其互作蛋白的作用位点奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔喜艳		3	23	2.0	3.0
5	刘晶	吉林农业大学生命科学学院	13	20	3.0	4.0
6	刘忠野	吉林农业大学生命科学学院	8	37	4.0	6.0
7	韩琳	吉林农业大学生命科学学院	7	15	2.0	3.0