SH-110菌海藻糖合成酶基因克隆、表达及酶学性质研究

• 作者: 付莉 尚宏丽 那鑫娜 顾英
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 海藻糖合成酶 克隆表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2012,（21）
• 所属期刊栏目: 生物技术—研究报告
• 页码范围: 169-173
• 分类号: Q784
• 字数: 3081字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6850.2012.21.031

摘要

为找到理想的工业化生产海藻糖合成酶基因工程菌,以长白山温泉SH-110基因组DNA为模板,PCR扩增编码Tres基因片段,克隆至pET-30a(+)原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),实验中采用IPTG和乳糖同时进行对比诱导,对表达产物进行SDS-PAGE和酶学性质研究.成功克隆了2912bp的Tres基因,实验中发现加入IPTG和乳糖后,融合蛋白在胞内都得到了表达,而且添加乳糖诱导的蛋白表达量偏高.表达重组酶Tres相对分子量约为110 kDa,最适作用温度60℃,最适pH 7.0.金属离子Ca2+、K+、Zn2+对重组酶有明显激活作用,Ba2+、Cu2+、Mn2+有明显抑制酶活作用.重组酶的动力学常数Km为8.823mmol/L和VVmax为235.29 mmol/L.已成功在大肠杆菌表达重组Tres,为进一步研究利用基因工程菌生产大量海藻糖合成酶,进行大规模生产海藻糖提供理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付莉		33	146	7.0	10.0
2	尚宏丽		35	73	5.0	7.0
3	顾英		33	151	6.0	11.0
4	那鑫娜		3	0	0.0	0.0