构建重组人pET-32a-瘦素高效的表达载体☆

• 作者: 巫国辉 文辉才 李小林 谢琳
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 瘦素 重组 变性 复性 克隆 原核表达 抗原反应原性 RT-PCR 酶联免疫吸附 组织工程
• 年，卷（期）: 2012,（37）
• 页码范围: 6926-6930
• 分类号: R318
• 字数: 4265字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.37.018

摘要

背景:瘦素的功能是作为脂肪细胞体脂量的信号来认识的,作为体内的能量平衡信号反馈到下丘脑,与其中各部位神经元的受体结合后参与调节进食、饮水、能量代谢.目的:构建原核重组表达载体pET-32a-瘦素并检测其在大肠杆菌BL21中的高效表达.方法:取人脂肪组织,RT-PCR法制备瘦素目的基因,采用DNA重组技术将其克隆至pMD18T与pET-32a原核表达载体,双酶切及测序鉴定,转化大肠杆菌BL21株诱导其表达,SDS-PAGE电泳分离鉴定,表达产物变性复性后,间接酶联免疫吸附法检测抗原反应原性.结果与结论:实验成功扩增出520 bp 的瘦素目的基因并构建了原核重组表达载体 pET-32a-瘦素;测序结果与GenBank收录序列相一致;目的蛋白pET-32a-瘦素呈极高效表达,占总蛋白的50%以上;变性复性后抗原反应原性较复性前明显提高(P<0.01).结果证实,实验成功构建原核重组高效表达的载体pET-32a-瘦素,并提高其抗原反应原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李小林	江西省人民医院整形颌面外科	34	179	8.0	11.0
2	巫国辉	江西省人民医院整形颌面外科	41	187	8.0	11.0
3	文辉才	南昌大学第一附属医院整形美容外科	46	161	7.0	10.0
4	谢琳	南昌大学第二附属医院眼科	12	43	4.0	6.0