CM-Dil及DAPI联合标记示踪人脐血单核细胞细胞膜及细胞核的可行性★

• 作者: 何金英 姚星宇 孙文芳 岑尧 杨丽敏 马玉珍
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 人脐血单核细胞 荧光染料 CM-DiI DAPI 示踪 形态 活性 脐血 脐血干细胞 组织工程
• 年，卷（期）: 2012,（41）
• 页码范围: 7631-7636
• 分类号: R394.2
• 字数: 5719字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.41.007

摘要

背景:氯甲基-1,1十八烷基-3,3,3’,3’-四甲基-吲哚-羧花青-高氯酸盐(chlormethylbenzamido-1,1-dioctadecyl-3,3,3’,3’-tetramethylin-docarbocyamine,CM-DiI)和4’,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)是常用的活细胞示踪剂,分别用来标记细胞膜和细胞核.目的:观察应用细胞膜及细胞核标记物CM-DiI及DAPI联合示踪人脐血单核细胞的可行性及双标后人脐血单核细胞体外培养过程中细胞形态及活性的变化.方法:将新鲜分离的人脐血单核细胞用示踪剂CM-DiI及DAPI进行双标记,体外培养双标后的人脐血单核细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,锥虫蓝染色检测不同时间细胞活性,同时倒置荧光显微镜观察不同时间经CM-DiI和DAPI双标的人脐血单核细胞荧光染色阳性数.结果与结论:人脐血单核细胞在CM-DiI和DAPI联合标记15 min后,荧光显微镜下可见标记细胞的细胞膜、细胞核分别在不同波长下分别呈现红色和蓝色的荧光.CM-DiI/DAPI双标后的人脐血单核细胞体外培养1,3,7,14,21 d, CM-DiI和DAPI双染的阳性细胞数各时间点比较差异无显著性意义.锥虫蓝染色观察人脐血单核细胞存活率为95.6%-98.8%.双标后的人脐血单核细胞体外培养过程中细胞形态变化与未经示踪标记的脐血单核细胞相比差异不明显,仍保持了良好的生长状态、贴壁能力和细胞增殖能力.由此证实,CM-DiI和DAPI可有效标记人脐血单核细胞,两种示踪剂对活细胞无毒不良反应,荧光衰减较慢,适用于干细胞标记及示踪.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙文芳	内蒙古自治区人民医院妇产科	20	35	3.0	5.0
2	杨丽敏	内蒙古医学院微生物与免疫教研室	57	454	12.0	18.0
3	何金英	内蒙古自治区人民医院妇产科	15	32	3.0	5.0
4	马玉珍	内蒙古自治区人民医院妇产科	46	122	6.0	9.0
5	姚星宇	满洲里南区医院内科	3	30	3.0	3.0
6	岑尧	内蒙古自治区人民医院妇产科	28	248	6.0	15.0