苹果MSAP技术体系的优化及其应用

• 作者: 吕晓婷 戴洪义 王爱华 赵春梅
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苹果 DNA甲基化 MSAP 体系优化
• 年，卷（期）: 2012,（22）
• 所属期刊栏目: 园艺—应用研究
• 页码范围: 287-292
• 分类号: Q-3
• 字数: 4669字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6850.2012.22.051

摘要

为建立适合苹果的MSAP(Methylation Sensitive Amplification Polymorphism)反应体系,以‘嘎啦’为材料,对MSAP技术中的关键因素进行优化筛选,并用于苹果叶片和愈伤组织的甲基化模式分析.经过不同因素水平摸索,结果表明:600ng基因组DNA用EcoRⅠ,HapⅡ或MspⅠ各10U,37℃保温12h,即可酶切完全.最佳预扩增体系为:酶连产物1μL、上下游引物各3μL、2×PCR mastermix 10 μL( Taq酶1U、dNTPs 5 mmol/L、Mg2+ 30 mmol/L)和ddH2O3μL.20 μL选择性扩增体系中,含有60倍稀释的模板DNA 2 μL、上下游引物各3μL、2×PCR mastermix 10 μL(Taq酶1U、dNTPs 5 mmol/L、Mg2+ 30 mmol/L)和ddH2O2μL.在该体系下选用2对引物对苹果叶片和愈伤组织进行甲基化模式分析,获得了清晰、重复性好的银染指纹图谱.平均每对引物可获得特异性条带12条,共获得特异性条带91条,表明该体系可用于苹果不同发育阶段DNA甲基化模式分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	戴洪义	青岛农业大学生命科学学院	88	585	13.0	20.0
2	赵春梅	青岛农业大学生命科学学院	13	38	4.0	5.0
3	王爱华	青岛农业大学生命科学学院	4	14	1.0	3.0
4	吕晓婷	青岛农业大学生命科学学院	1	11	1.0	1.0