人类风湿性关节炎滑膜组织cDNA文库的构建

• 作者: 任蕾 刘彦虹 卢秀敏 闫永毅 高飞
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 类风湿性关节炎 基因文库 cDNA
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3045-3048
• 分类号: R593.22
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人类风湿关节炎(RA)滑膜组织cDNA文库.筛查与RA相关的特异基因,为探讨RA的发病机制及基因治疗奠定基础.方法:提取人类风湿关节炎滑膜组织RNA并使用Trizol法纯化mRNA;运用mRNA5'末端的模板转换方法以powerscriptTM逆转录酶进行转录,使用COS Ⅲ/3'PCR引物合成第1链cDNAs;长距离聚合酶链反应(LD-PCR)合成双链cDNA; PCR产物经蛋白酶K水解并纯化后,经SfiI酶切、柱层析洗脱,重组于TripIEx2载体并包装后,测定滴度、重组率、扩增文库,随机挑取40个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,以检测所构建cDNA文库的质量.结果:未扩增文库的滴度为6.89× 106pfu/mL;扩增后文库滴度为2.63× 109 pfu/mL,重组效率为93％；插入片段主要集中在300～1800bp.结论:成功构建了一个人类风湿关节炎(RA)滑膜组织cDNA文库,可以用探针抗体等做免疫学筛选,为进一步探寻与RA疾病相关的基因奠定坚实基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘彦虹		48	136	6.0	8.0
2	任蕾		10	39	3.0	6.0
3	高飞		15	44	4.0	5.0
4	闫永毅		3	2	1.0	1.0
5	卢秀敏		5	11	2.0	3.0