GST-hPlk2融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达

• 作者: 付勤 李妍 杨礼庆 梁峰 梁爽 沈涛
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: hPlk2 原核细胞 表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3,6
• 分类号: R392.12
• 字数: 2684字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2012.16.001

摘要

目的 构建GST-hPlk2融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达.方法 从人HEK293细胞中提取mRNA,反转录为cDNA.用PCR方法扩增出hPlk2基因全长,通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点将其定向插入pGEX-4T-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-4T-2-hPlk2,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,通过限制性内切酶酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入Ecoli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷大量诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定.结果 酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒GST-hPlk2,并用Western blot方法证实了GST-hPlk2融合蛋白的表达.结论 成功构建了GST-hPlk2原核表达载体,并证实了其在原核细胞E coli中的表达,为进一步纯化Plk2及研究其结构与功能提供了前提基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付勤		182	1030	16.0	22.0
2	沈涛		27	129	5.0	11.0
3	杨礼庆		47	337	10.0	16.0
4	梁峰		34	157	8.0	11.0
5	梁爽	明尼苏达大学实验病理系	1	0	0.0	0.0