柯萨奇病毒A组16型TaqMan一步法荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立

• 作者: 李明 杜红延 蔡丽娟 陈瑶 陈骊嘉
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 柯萨奇病A组16型 TaqMan探针 一步法荧光定量RT-PCR 检测
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 598-600
• 分类号: R440
• 字数: 3172字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2012.05.011

摘要

目的 建立一种快速、灵敏、特异和准确的一步法荧光定量RT-PCR方法 用于检测柯萨奇病毒A组16型(Coxsackieviruses A16,CoxA16).方法 根据GenBank登录的CoxA16基因序列,应用生物学软件进行同源性序列比对后,选出CoxA16高度保守且特异的核苷酸区域polyprotein 基因,设计特异性引物和TaqMan探针;构建重组质粒作为阳性标准品,建立检测CoxA16的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,并对该方法 的特异性、敏感性、重复性进行评价.结果 成功建立了CoxA16的FQ-PCR检测方法 和定量标准曲线,该方法 最低检测限为101个拷贝/μL,与常规PCR相比,敏感性提高100倍.组内和组间重复性实验的变异系数小于2%.该检测方法 特异性强,与肠道病毒71型、柯萨奇病毒B组5型、脊髓灰质炎病毒、肠道病毒75型、登革热病毒、霍乱弧菌O1、霍乱弧菌O139、大肠杆菌O157均不发生交叉反应.结论 本实验建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法 灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于CoxA16感染的日常检测和实验室早期快速诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李明	南方医科大学生物技术学院	212	862	14.0	18.0
2	陈瑶	南方医科大学生物技术学院	25	121	7.0	10.0
3	杜红延	南方医科大学生物技术学院	35	97	5.0	8.0
4	蔡丽娟	南方医科大学生物技术学院	1	2	1.0	1.0
5	陈骊嘉	南方医科大学生物技术学院	1	2	1.0	1.0