稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系的建立及CCL17活化T淋巴细胞功能的初步鉴定

• 作者: 沈晗 聂建云 邵红伟 黄树林
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: CCL17 肝癌细胞系 稳定转染 T淋巴细胞
• 年，卷（期）: 2012,（21）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3217-3219
• 分类号: R735.7
• 字数: 3004字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2012.21.011

摘要

目的 建立稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系并初步验证CCL17活化T淋巴细胞的抗肿瘤功能.方法 分离肝癌患者腹腔液单个核细胞及淋巴细胞,提取单个核细胞总RNA,RT-PCR扩增CCL17基因,经克隆测序后将CCL17插入真核表达载体pCDNA3.1(-);将真核表达质粒转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,利用G418筛选抗性单克隆细胞株,Western blot检测细胞培养上清中CCL17的表达水平;用含CCL17的培养上清液刺激腹腔液来源淋巴细胞后,再与BEL-7402细胞共孵育,利用Annexin V/PI凋亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡率,倒置相差显微镜观察肿瘤细胞形态学改变.结果 成功克隆出CCL17基因全长序列,并构建了真核表达质粒pCDNA3.1(-)-CCL17;质粒转染BEL-7402细胞后经G418筛选获得5个抗性单克隆细胞株,Western blot结果显示5株细胞培养上清液中均有CCL17表达,其中克隆株F9、F11和G8表达量较高;与对照组比较,含CCL17培养上清液刺激后的腹腔液淋巴细胞,能诱导BEL-7402细胞发生显著凋亡样改变.结论 成功构建了稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系,并初步证实含CCL17的细胞培养上清液有活化T淋巴细胞,促进杀伤肿瘤的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄树林	广东药学院生命科学与生物制药学院	84	302	8.0	11.0
2	邵红伟	广东药学院生命科学与生物制药学院	34	126	6.0	9.0
3	沈晗		1	2	1.0	1.0
4	聂建云	广东药学院生命科学与生物制药学院	1	2	1.0	1.0